El desarrollo de métodos precisos y modulados para la manipulación personalizada del ADN es un objetivo importante para el estudio y la ingeniería de procesos biológicos y resulta esencial para la optimización de la terapia génica, el flujo metabólico y las redes de genes sintéticos. La proteína 9 asociada a la repetición palindrómica corta agrupada y regularmente interespaciada (CRISPR) es un complejo de unión al ADN específico del sitio guiado por ARN que puede reprogramarse para interactuar específicamente con una secuencia de ADN diana deseada. CRISPR-Cas9 se ha utilizado en una amplia variedad de aplicaciones que van desde la ciencia básica a la clínica, como la terapia génica, la regulación de genes, la modificación de epigenomas y la obtención de imágenes de cromosomas. Aunque Cas9 se ha utilizado con éxito como una herramienta precisa en todas estas aplicaciones, también se han señalado algunas limitaciones, por ejemplo (i) una estricta dependencia de una secuencia de motivo adyacente al protoespaciador (PAM), (ii) una actividad aberrante fuera del objetivo, (iii) el gran tamaño de Cas9 es problemático para la entrega CRISPR, y (iv) la falta de modulación de la unión a proteínas y la actividad endonucleasa, que es crucial para el control espaciotemporal preciso de la expresión génica o la edición del genoma. Estos obstáculos dificultan el uso de CRISPR para el tratamiento de enfermedades y en aplicaciones biotecnológicas más amplias. Los métodos de ingeniería de proteínas ofrecen soluciones para superar las limitaciones de Cas9 y generar herramientas robustas y eficientes para la manipulación personalizada del ADN. En este artículo se revisan los enfoques recientes de ingeniería de proteínas para ampliar la versatilidad de la proteína Cas9 (SpCas9) de Streptococcus pyogenes, haciendo hincapié en los estudios que mejoran o desarrollan nuevas funciones proteicas mediante la fusión o división de dominios, el diseño racional y la evolución dirigida.
Citación recomendada (normas APA)
Hindawi, "Protein Engineering Strategies to Expand CRISPR-Cas9 Applications", -:Revista VirtualPRO,, 2018. Consultado en línea en la Biblioteca Digital de Bogotá (https://www.bibliotecadigitaldebogota.gov.co/resources/3892168/), el día 2025-12-20.
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